标签： 大鼠ELISA试剂盒 爱赛因试剂盒 生化试剂盒 稀释液 标准品 封板膜
使用大鼠ELISA试剂盒实验时需遵循哪些操作流程
使用大鼠ELISA试剂盒的标准化操作流程共分6步，严格遵循程度降低实验误差，步骤如下：
1.实验前准备（30分钟完成）
试剂盒从2-8℃冰箱取出，室温（18-25℃）平衡30分钟，避免试剂温差影响反应速率；
按说明书比例稀释浓缩洗涤液（常见20×浓缩液按1:19加蒸馏水），若有结晶可37℃水浴助溶；
冻干标准品现配现用：复溶后室温静置10分钟充分混匀，再梯度倍比稀释得到5-7个浓度标准品，空白孔直接用样本稀释液做零浓度；
提前取出待测样本室温融化，离心去除沉淀后备用，避免反复冻融。
2.加样与孵育
提前设置好空白孔、标准品孔、待测样本孔，建议所有样本和标准品做复孔保证重复性；
加样规则：空白孔加50μL样本稀释液；标准品孔加50μL对应浓度标准品；待测样本孔先加40μL样本稀释液，再加10μL待测样本（最终稀释倍数为5倍，若样本浓度过高可提前调整稀释比例）；
加样后轻轻晃动孔板混匀，盖上封板膜，37℃恒温箱孵育60分钟。
3.洗板
揭掉封板膜，弃去孔内液体甩干；每孔加满稀释后的洗涤液，静置1分钟后弃去，重复洗涤5次，最后在吸水纸上用力拍干所有残留液体；
手工洗板时注意每次洗涤都要加满孔，避免洗涤不彻底导致背景偏高。
4.加酶与二次孵育
除空白孔外，每孔加入100μLHRP标记的检测抗体；
重新盖上新的封板膜，37℃恒温箱再次孵育60分钟（部分简化试剂盒此处为30分钟，以说明书为准）；
孵育完成后重复上述洗板步骤5次，充分拍干。
5.显色与终止
每孔先加50μL显色剂A，再加50μL显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光孵育15-20分钟；
孵育完成后，每孔加入50μL终止液，终止反应（此时蓝色会立刻转为黄色），终止后轻轻晃动孔板混匀均匀。
6.读数与结果计算
加入终止液后15分钟内，用酶标仪在450nm波长下读取每孔的吸光度（OD值）；
以标准品浓度为横坐标、对应OD值为纵坐标，用四参数逻辑法拟合标准曲线；
根据样本OD值从标准曲线查出对应浓度，再乘以样本的稀释倍数，得到大鼠样本中目标蛋白的实际浓度。
注：以上仅供参考，不作为实验依据，具体请联系品牌或技术老师!
爱赛因生物技术(广州)有限公司专注于生物医药、临床诊断、IVD检测、微流控芯片等领域的封板膜及生物医疗胶带产品的研发、生产与销售。更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎来电!
